| Индекс УДК | 663.1 |
|
Прогнозирование применимости ПЦР-ПДРФ-анализа для тестирования сортового многообразия винограда Рамиль Ришадович Вафин, Ирина Юрьевна Михайлова, Ирина Игоревна Агейкина |
|
| Аннотация | Для геноидентификации технических сортов винограда может быть применен молекулярно-генетический анализ по локусу гена UFGT (UDP-glucose: flavonoid 3-O-glucosyltransferase - уридиндифосфат-глюкоза: флавоноид 3-О-глюкозилтрансфераза) Vitis vinifera L. длиной 705 нуклеотидов, насчитывающий 34 полиморфные позиции (1 INDEL и 33 SNPs). Тогда как при ДНК-аутентификации виноматериалов и вин целесообразен анализ локуса меньшей длины (из-за сильной фрагментации остаточных нуклеиновых кислот винограда, экстрагируемых из винного дебриса), затрагивающий 5 детектируемых полиморфных позиций (1 INDEL и 4 SNPs), интерпретация которых может позволить охарактеризовать 13 UFGT-ген-ассоциированных групп не только методом прямого секвенирования специфичного ПЦР-продукта, но и другими подходами, требующими отработки. Поэтому целью настоящего исследования являлась прогнозная оценка применимости ПЦР-ПДРФ-анализа для детекции 5 диагностически значимых полиморфных позиций и последующей идентификации 13 UFGT-ген-ассоциированных групп Vitis vinifera L. при тестировании сортового многообразия винограда, а также производимого из него виноматериала. Выделение ДНК из пробоподготовленного биоматериала может быть выполнено коммерческим набором innuPREP Plant DNA Kit, а постановка ПЦР с праймерами UFGT-F1 и UFGT-R2 - Phire Plant Direct PCR Master Mix. ПДРФ-анализ осуществляется с подобранными эндонуклеазами рестрикции (PstI, BsaXI, BtsIMutI и HinfI). Детекция ПЦР-ПДРФ-фрагментов выполняется визуализацией электрофореграмм в УФ-трансиллюминаторе. Выравнивание и рестрикционное картирование референсных нуклеотидных последовательностей локуса UFGT гена Vitis vinifera L. проведено с применением программ BLAST, ClustalW и NEBcutter V2. 0, с последующим моделированием соответствующих ПЦР-ПДРФ-профилей. В результате исследования установлено, что применимость ПЦР-ПДРФ-анализа для идентификации 13 UFGT-ген-ассоциированных групп Vitis vinifera L. прогнозируемо достигается подбором диагностически ценных эндонуклеаз рестрикции, каждая из которых способна дискриминировать определенную полиморфную позицию, включая последнюю, детектируемую благодаря модификации обратного праймера UFGT-R2, приводящего к искусственно создаваемому сайту рестрикции для HinfI при SNP c заменой цитозина (C) на гуанин (G). Исследования проводились в Межотраслевом научно-техническом центре мониторинга качества пищевых продуктов Всероссийского научно-исследовательского института пивоваренной, безалкогольной и винодельческой промышленности - филиала Федерального научного центра пищевых систем им. В. М. Горбатова РАН. |
| Название источника | Пищевая промышленность |
| Место и дата издания | 2023 |
| Прочая информация | № 1. - С. 6-9 |
